酶聯免疫分析實驗中遇到這些問題怎么辦

酶聯免疫分析實驗中遇到這些問題怎么辦?


1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。


這一方法的基本原理是：
①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺有無定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。


我們正常會在ELISA試劑盒實驗中出現各種問題，如果能提前知道一些關于ELISA實驗的要領就可以正確的避免這些問題的出現，今天信帆生物就為各位老師總結了十個關于ELISA實驗中需要注意的問題： 

1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但需要有專業人員進行矯正。 

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。 

3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。 

4、ELISA試劑盒實驗時，要使底物避光保存。 

5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。 

6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。 

7、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。 

8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。 

9、應盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數據的準確性。 

10、ELISA試劑盒對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。


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